产品简介

本品为使用大肠杆菌 DH5α 菌株制备的高效化学感受态细胞，转化效率可达 10⁸ cfu/μg DNA，被广 泛用于质粒转化、基因克隆等；可以使用蓝白斑筛选。

产品组成

基因型： F ^- φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF) U169 recA1 endA1 hsdR17(rk^-, mk⁺) phoA supE44 thi-1 gyrA96 relA1 λ

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

产品特性

-该菌株的重组率较低，故常用于克隆质粒的保存；

-蓝白斑筛选时，需在平板上预先涂布 IPTG 和 X-gal；

-属于 E. coli K12 系列，可用于基因克隆等；不可用于以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的蛋白表达。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁸ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90 s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。