产品简介

Rosetta-gami 2 系列菌株是集合了 Rosetta 2 系列菌株和 Origami 2 系列菌株的优点；Rosetta-gami 2 (DE3)系列菌株是来源于 Origami 2 系列菌株，在其染色体上带有溶源性的 λDE3，可表达 T7 RNA 聚合酶。由于该菌株不含卡纳抗性，适用于 pET 系列载体及其他 T7 启动子系列载体。该菌株携带 有 trxB 和 gor 基因突变，从而提高了含二硫键正确折叠蛋白的表达效率；同时带有的 pLacIRARE2 质粒（携带氯霉素抗性），除了能够提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六个稀有密码子的 tRNA 外，还提供了第七个稀有密码子 CGG 的 tRNA，因而能够增强真核细 胞蛋白在大肠杆菌中的表达水平。此外，LacI 蛋白也可以抑制 T7lac 启动子在无诱导剂时 的本底表达。经 pUC19 质粒转化检测，Rosetta-gami 2 (DE3) pLacI 感受态细胞的转化效率可达 10⁷ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：Δ(ara-leu)7697 lacX74 phoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac⁺ lacI^q pro] gor522::Tn10 trxB pLacIRARE2 (Cam^R , Str^R , Tet^R )

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除 pLacIRARE2 外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁸ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。