产品简介

Stbl2 菌株来源于大肠杆菌 JM109 菌株，适合于克隆含不稳定序列（如正向重复序列、反向重复序列、 逆转录病毒的序列等）。另外，mcrA 基因的突变和 mcrBC-hsdRMS-mrr 基因缺失使得该菌株更适于克 隆甲基化的基因组序列；同时 Stbl2 也可用于慢病毒载体的构建。该菌株中 recA1 和 endA1 的突变有利 于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。Stbl2 感受态细胞的平板生长最优条件 是 30 ℃。Stbl2 感受态细胞中包含有 α 互补序列的质粒，所以本宿主菌株不能被用于蓝白斑筛选实验； 本菌株也不耐受 ccdB 毒性。经 pUC19 转化检测，Stbl2 感受态细胞的效率可达 10⁷ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：F^-endA1 glnV44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 Δ(lac-proAB) mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) λ^-

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

产品特性

-属于大肠杆菌 K 株系列，主要用于目标基因的克隆和质粒的保存；不可用于以 T7 RNA 聚合酶为 表达系统的蛋白表达；

-该菌株适合克隆不稳定插入片段，甲基化的基因组序列，以及慢病毒载体的构建。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁷ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90 s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。