产品简介

TOP10F’菌株来源于 TOP10 菌株；该菌表达 LacI 抑制子，可抑制 trc，tac，lac 等启动子下游基因 的表达，从而可以用于保存或扩增一些表达毒性蛋白的质粒。recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。由于携带lacZΔM15突变，因此该菌可用于含Xgal和IPTG 的琼脂平板上菌落的蓝/白斑筛选。此外，该菌株自身携带四环素抗性。经 pUC18 质粒转化检测， TOP10F’感受态细胞的转化效率可达 10⁸ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：F’{lacI^q Tn10 (Tet^R)} mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 lacX74 recA1 araD139 (ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留

化学法转化效率≥10⁸ cfu/μg pUC18 DNA

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。