产品简介

ArcticExpress (DE3) pRARE2 来源于 ArcticExpress (DE3)，将具有氯霉素抗性的 pRARE2 质粒导入 ArcticExpress (DE3)细胞中即是 ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2 菌株染 色体 DNA 中整合了 λ 噬菌体 DE3 区，使得 ArcticExpress (DE3) pRARE2 菌株可同时表达 T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶，广泛用于 pET 系列， pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达。 ArcticExpress (DE3) pRARE2 菌株具有四环素，庆大霉素，氯霉素抗性；endA1 突变有利于质粒 DNA 的稳定。[cpn10cpn60 Gent^R ]的存在使 ArcticExpress (DE3) pRARE2 可以表达适应低温的伴侣 蛋白 Cpn10 和 Cpn60（来自嗜冷菌—Oleispira antarctica）。Cpn10 和 Cpn60 伴侣蛋白在 4-12 ℃表现出 较高活性，在 ArcticExpress(DE3) pRARE2 细胞中表达时，可降低重组蛋白包涵体的形成，增加可溶重 组蛋白的表达量及生物活性，比传统的原核表达伴侣蛋白 GroEL、GroES 等具有更加优异的促融能力。 同时，pRARE2 质粒可补充大肠杆菌缺乏的 7 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA 和 CGG)对应的 tRNA，提高外源基因的表达水平。公司生产的 ArcticExpress (DE3) pRARE2 感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率达 10⁸ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：E. coli B F^– ompT hsdS (rB ^– mB ^– ) dcm⁺ Tet^R gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 Gent^R ] pRARE2 (Cam^R )

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除 pRARE2 外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁸ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。