产品简介

Rosetta(DE3) pLacI 菌株具有氯霉素抗性，补充大肠杆菌缺乏的 6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的 tRNA，提高外源基因（特别是真核基因）在原核系统中的表达水平。该 菌株的染色体上整合了 λ 噬菌体 DE3 区（DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶），可同时表达 T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶，因此可用于 pET 系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达。此外， 该菌株携带了氯霉素抗性质粒 pLacIRARE，能够额外表达 lac 转录抑制蛋白，可以抑制目的基因的本底 表达水平。经 pUC19 质粒转化检测，Rosetta(DE3) pLacI 感受态细胞的转化效率可达 10⁷ cfu/μg DNA 以上。

产品组成

基因型：F ^- ompT hsdSB (rB ^-mB ^- ) gal dcm (DE3) pLacIRARE (Cam^R )

存储条件

-80 ℃保存，请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除 pLacIRARE 质粒外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁷ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。