产品简介

Rosetta 2(DE3) pLysS 来源于 Rosetta(DE3) ， 本菌株含有 pLysSRARE2 质 粒 ， 除了能够提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六个稀有密码子的 tRNA 外，还 提供了第七个稀有密码子 CGG 的 tRNA。Rosetta2(DE3)pLysS 载体通过提供稀有密码子，使得该宿主菌 相对于其他大肠杆菌，能够提供更加“通用”的蛋白质表达，从而提升目的蛋白表达水平。DE3 是溶源性 的 λDE3, 所以带有 T7 RNA 聚合酶的染色体拷贝，故而适用于 pET 系列载体及其他 T7 启动子系列载体。 该菌株含有 pLysSRARE2 质粒，除了提供稀有密码子外还能够产生 T7 溶菌酶，可以有效降低目的基因 的基础表达水平。同时， pLysSRARE2 质粒具有氯霉素抗性。此外， pLysSRARE2 质粒的起始复制位 点是 p15 Origin, 这使得该质粒能够和 pUC-及 pBR322-衍生的质粒互相共存。经 pUC19 质粒转化检测， Rosetta 2 (DE3)pLysS 感受态细胞的转化效率可达 10⁸ cfu/μg DNA 以上。

产品组成

基因型：F ^- ompT hsdSB (rB ^-mB ^- ) gal dcm (DE3) pLysSRARE2 (Cam^R )

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除 pLysSRARE2 外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁸ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。