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- 产品名称: ToloAccurate Multi-Mut kit
- 产品货号: 24302
- 货期: 现货
- 价格与订购: 900/2000
- 数量:
- 规格: 10rxn 25rxn
- 产品信息
- 如何订购
产品简介
ToloAccurate Multi-Mut kit由 FastPfu DNA polymerase Premix、EzmaxTM OneStep Cloning kit 和特异性降解甲基化质粒的感受态细胞 JM330 组成。本试剂盒最大的特点是目标质 粒的扩增产物无需 DpnI 消化可直接快速转化高达 108转化效率的大肠杆菌 JM330 感受 态细胞,同时配合以极速扩增可达 1.5 kb/s 的 FastPfu Premix 预混液,以及 10 min 超快 速无缝拼接试剂盒 EzmaxTM OneStep Cloning kit,最大化提高了点突变的准确率和实验 效率。如果扩增的 PCR 产物条带单一,则可直接用于重组反应,并最快可在一小时内 完成全部的多点突变实验过程。快速高效的特点使得 ToloAccurate Multi-Mut kit 从众多 的点突变试剂盒中脱颖而出成为点突变构建的首选试剂盒。
产品组成
组分 | 24302-01 (10 rxn) | 24302-02 (25 rxn) |
2×Tolo FastPfu Premix | 250μL | 500μL |
Ezmax Single OneStep Cloning | 20μL | 50μL |
5× Ezmax buffer | 40 μL | 100 μL |
JM330 Competent Cell | 15支(100μL/支) | 30支(100μL/支) |
#JM330 Competent Cell 应置于-80 ℃储存,其他组分请于-20 ℃储存。
产品特点
*扩增产物不需要 Dpn I 处理,极大的节省了实验时间和实验成本。
*FastPfu DNA polymerase 超高的保真度保证了点突变的精准度,高效的长片段扩增能 力可以对 20kb 以内质粒上的任何位点进行点突变。
*FastPfu Premix 高效的扩增能力大大增加了扩增产物的产量,极大降低了甲基化质粒的占比。
* Ezmax Single OneStep Cloning kit 高效的重组能力,可对质粒上任何位点进行单点突变,或两个不连续位点(相距不超过 50 bp)进行突变。
使用流程
常见问题与注意事项
引物设计
在待突变的位点附近设计正反向引物,正反向 引物的 5’端需包含 15-20 bp 的同源序列,若突 变位点在同源序列部分,则两条引物都需要携 带突变位点,若突变位点不在同源序列部分, 则只需一条引物携带突变位点即可,注意勿将 突变位点置于引物末端。
非目标位点突变
模板质粒扩增前携带未知突变,可重新在突变 位点附近设计引物,测序验证。 扩增循环过多,扩增过程引物突变,可降低循 环数,最好不超过 35 cycle,推荐 30 cycle。
定点突变未成功
检查引物设计是否正确。 模板质粒是否为非甲基化质粒,且模板质粒是 否加入量过多。注意:模板需要使用甲基化的 质粒模板,且 1 ng 足以使 PCR 扩增正常进行。
无法扩增出条带
检查引物设计是否正确?或者体系配置有误, 需重新重复实验。模板质粒放置过久?模板的 质量变差或断裂,则需重新提取质粒。
特别提醒
正反向引物的互补区 15-20 bp 应尽量避开具有 重复序列的区域,GC含量在 40%-60%为宜,低 于 30%或高于 70%均会影响点突变的效率。
Note
For research use only. Not suitable for clinical or therapeutic use.