产品概述

本产品是使用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行 qPCR 反应的专用预混液。核心组分 Q3 Taq DNA Polymerase 为一种新型的配体法热启动 DNA 聚合酶，具有特异性强、检测灵敏度高等诸多优点，配以针对 qPCR 优化的最适反应缓冲液，非常适合于进行高特异性、高灵敏度的 qPCR 反应。本产品是一种含有 qPCR 反应最适浓度 SYBR Green I 的 2×预混试剂，可以在宽广的定量区间内得到良好的标准曲线，基因定量准确、重复性好、可信度高。本产品未预混 ROX 染料，适用于 Bio-Rad、Roche 等不需要添加 ROX 校正的机型；对于其它需要添加 ROX 校正的机型，可选用本公司的对应产品，亦也可以在本产品的反应体系中自行添加适宜浓度的 ROX 进行校正。

产品组分

包含：dNTPs, Mg²⁺ , Q3 Taq DNA Polymerase, SYBR Green I 等。 

适用机型

本产品中不包含用以校正孔与孔之间荧光信号误差的 ROX Reference Dye，适用于以下荧光定量 PCR 仪: Bio-Rad CFX96™，CFX384™，iCycleriQ™，iQ™5，MyiQ™，MiniOpticon™，Opticon^®，Opticon 2，Chromo4™， Cepheid SmartCycler^®，Eppendorf Mastercycler^® ep realplex，realplex 2 s，Illumina Eco qPCR，Qiagen/Corbett RotorGene^® Q，Rotor-Gene^® 3000，Rotor-Gene^® 6000，Roche Applied Science LightCycler™ 480，Thermo Scientific PikoReal Cycler；及其他不需要添加 ROX Reference Dye 的荧光定量 PCR 仪。

保存条件

-20°C 避光保存；Master Mix 解冻后可于 2 ~ 8°C 避光条件下稳定存放 6 个月。

Master mix 解冻后可能出现些许白色沉淀，室温放置片刻并上下颠倒，沉淀即会溶解。请确认沉淀完全溶解，并充分混匀后使用。

质量控制

纯度检测：所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶、核酸残留。

功能检测：以质粒或者 HeLa 细胞总 RNA 逆转录产物的稀释液为模板，扩增 5 个基因，每个基因的熔解曲线为单峰，特异性好。

实验流程

1. 在 qPCR 管中配制如下混合液

反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整：

—般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 μM 即可得到较好的扩增效果。当反应性能比较差时，可以在终浓度范围内（0.1- 1.0 μM）调整引物浓度。

qPCR 灵敏度极高，建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响。推荐将模板稀释后加入反应体系中，这样可以有效提高实验的重复性。

如模板类型为未稀释 cDNA 原液，使用体积不应超过 qPCR 反应总体积的 1/10。 

2. 按下列条件进行 qPCR 反应

A:该预变性条件适合绝大多数扩增反应，如模板结构复杂，可将预变性时间延长至 3 min 提高预变性效果。

B:300 bp 以内的扩增子，延伸时间设置为 30 sec 即可；超过 300 bp 的扩增子，推荐延长延伸时间至 60 sec。

C.仪器类型不同，熔解曲线采集程序不尽相同，使用仪器默认熔解曲线采集程序即可。

Note

For research use only. Not suitable for clinical or therapeutic use.