货号（Catalog#）

ATK00018

描述（description）

SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(K417N,E484K,N501Y)基于中和抗体ELISA检测的原理，可以检测血清或血浆中抗SARS-CoV-2病毒的中和抗体浓度，这种抗体可以阻断RBD(K417N,E484K,N501Y)和ACE2之间的相互作用，该试剂盒包含两个关键成分：HRP标记的重组人ACE2蛋白和SARS-CoV-2病毒RBD(K417N,E484K,N501Y)蛋白。

本试剂盒用于测定血清或血浆样本 RBD(K417N,E484K,N501Y)中和抗体的浓度。

运输方式（Shipping）

蓝冰运输。

稳定性&储存（Stability &Storage）

收到试剂盒后请将阳性对照、阴性对照、检测溶液 A 以及预包板保存于-20℃，封板膜放置于常温保存,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。

试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。

使用方法（Standard Operating Procedure）

所需设备及试剂

450 nm滤光片酶标仪，含540 nm或570nm校正波长更佳

单道或多道微量移液器，移液器枪头

去离子水

500 mL量筒

样品稀释管或不同规格EP管

吸水纸

一、样品收集与储存

处理所有的血液和血清，请按照NCCLS提供的处理和储存血清和血浆样本的建议（1990年

H18-A批准的血液样本处理和处理标准程序）。

血清样本：全血室温放置60分钟或4℃过夜，然后1000 x g离心15分钟，取上清检测，或分

装后于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。

血浆：使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆，样品采集后30分钟内1000 x g离心

15分钟，取上清检测，或分装后于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。

二、试剂准备

使用前将所有试剂和样本置于室温平衡。

20×浓缩清洗液：如果浓缩清洗液中有晶体析出，平衡至室温并摇匀，直到晶体完全溶解，25mL浓缩清洗液使用去离子水定容至500mL，得到清洗液。

待测样本：将待测样本用样本稀释液按照体积比1:9稀释，例如10μL样本加入90μL样本稀释液。

阳性对照：临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，使用样本稀释液

1:100稀释至工作浓度。

阴性对照：临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，使用样本稀释液1:10稀释至工作浓度。

检测溶液A（HRP标记）：临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，使用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。

显色液：避光保存，显色时100μL /孔。室温下孵育8〜10分钟。

终止液：显色完毕后50μL /孔。

三、实验步骤

使用前将所有试剂和样本置于室温，建议对所有标准品、对照品和样本进行一式两份的分析。

1. 按照前面章节的指示准备所有试剂和样本。

2. 从板架上取下多余的微孔板条，将其放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。

3. 将稀释的阳性对照、阴性对照和待测样本分别与检测溶液A按照 1:1等体积混合。例如，将100μL阳性对照与100μL检测溶液A混合，该步骤可在96孔PCR板或者96孔Elisa板中进行。

4. 将阳性对照混合物、阴性对照混合物和待测样本混合物各100µL添加到对应的酶标板孔中，用封板膜盖好，37℃孵育1小时。

5. 弃去孔内液体，每孔加入 300μL的清洗液，轻微震荡后弃去孔内液体，将酶标板倒扣在吸水纸上轻拍，使残留在孔内的液体全部去除，重复洗板 5 次，此过程也可采用尖嘴喷射瓶，多道移液器或自动洗板机来完成。

6. 每孔加入100μL显色液，37℃避光显色8-10分钟。

7. 每孔加入50μL终止液，孔里的颜色应该由蓝色变至黄色，如果孔内颜色为绿色或颜色变化不均匀，轻轻震动酶标板使颜色均一。

8. 擦干酶标板底部水气，立刻用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的O.D.值，如果波长校正可用，则设置为540 nm或570 nm，如果波长校正不可用，则从450 nm的读数中减去540 nm或570 nm的读数，这种修正可去除酶标板读数中的光学偏差，如果没有校正波长，可直接读取450 nm的读数，但读值有可能不准确。

四、结果判读

为确保结果的有效性，每次检测必须包括阳性和阴性对照，阳性对照和阴性对照检测OD450必须在下表所列的范围内，如果OD450值不符合下表要求，则试验无效，必须重复进行。

用抑制率来判定样本中抗SARS-CoV-2中和抗体的水平，判定公式如下：

五、判定阈值

六、精密度

批内差：CV<8%

批间差：CV<10%

七、稳定性

试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。

八、实验细节说明

1. 在试剂盒标签上的有效期内使用，不要与其他厂家的试剂盒混合使用。

2. 如果阴性对照或阳性对照检测OD值超出检测范围，可适当缩短显色时间。

3. 为避免交叉污染，不同标准品、样本、试剂的加样需更换移液枪头，每管试剂使用单独的容器储存。

4. 在孵育过程中贴紧封板膜。

5. 显色液避光保存，临用前15分钟从冰箱取出室温平衡。

6. 浓缩清洗液（20×）需使用去离子水1：20稀释至工作浓度，去离子水不包含在试剂盒中，需实验人员自备。

7. 终止液为酸性溶液，具有轻微腐蚀性，使用时避免接触皮肤、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接触，使用大量清水冲洗后观察接触部位反应，如情节严重请及时就医。

8. 试剂盒酶标板条可按需拆卸使用，已开封的试剂盒建议在1个月内使用，未开封的试剂盒所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存，收到试剂盒后请将阴性对照、阳性对照、检测溶液 A以及 96 孔板保存于-20℃，其余试剂请置于 4 ℃保存备用。

九、常见问题解决指南

组分和说明（Component and Instruction）

Note

For research use only .