产品概述（Summary）

产品名称（Product name）

SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Protein检测试剂盒

货号（Catalog#）

CSK00013

描述（description）

本试剂盒采用双抗夹心ELISA定量分析技术，将抗Nucleocapsid蛋白兔多克隆抗体预先包被在酶标板上，之后将标准品或分析样本加入到微孔中，样本中Nucleocapsid蛋白会被预包被的抗体捕获，清洗掉未结合的物质后，将生物素标记的抗Nucleocapsid蛋白单克隆抗体加入到微孔中反应，形成夹心复合物，再加入HRP标记的链霉亲和素，清洗掉未结合的抗体及酶试剂之后，将显色液添加到微孔中显色，显色强度与样品中Nucleocapsid蛋白浓度成正比。

本试剂盒用于测定支气管肺泡灌洗液、鼻咽拭子样本或重组表达样本中Nucleocapsid蛋白的浓度。

运输方式（Shipping）

蓝冰运输。

稳定性&储存（Stability &Storage）

收到试剂盒后请将标准品、检测溶液 A、检测溶液 B 以及预包板保存于-20℃，封板膜放置于常温保存,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。

试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。

使用方法（Standard Operating Procedure）

所需设备及试剂
450 nm滤光片酶标仪，含540 nm或570nm校正波长更佳
单道或多道微量移液器，移液器枪头
去离子水
500 mL量筒
样品稀释管或不同规格EP管
吸水纸

一、试剂准备
使用前将所有试剂和样本置于室温平衡。
1. 20×浓缩清洗液：如果浓缩清洗液中有晶体析出，平衡至室温并摇匀，直到晶体完全溶解，25mL浓缩清洗液使用去离子水定容至500mL，得到清洗液。
2. 用2mL标准品/样本稀释液溶解Nucleocapsid蛋白标准品冻干粉，溶解后标准品浓度为80ng/mL。轻轻混匀后静置10分钟，然后进行标准品的稀释, 准备 7 个稀释标准品的 EP 管，每个 EP 管中加入500μL的标准品稀释液，依次倍比稀释成 80ng/mL、 40ng/mL、20ng/mL、 10ng/mL、 5ng/mL、2.5 ng/mL、 1.25ng/mL, 标准品/样本稀释液（0ng/mL）直接作为空白孔。
3. 检测溶液A（生物素标记）：临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，使用检测溶液稀释液1:100稀释至工作浓度。
4. 检测溶液B（HRP标记）：临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，使用检测溶液稀释液1:100稀释至工作浓度。
5. 显色液：避光保存，显色时100μL /孔。
6. 终止液：显色完毕后50μL /孔。

二、实验步骤
使用前将所有试剂和样本置于室温，建议对所有标准品、对照品和样本进行一式两份的分析。
1. 按照前面章节的指示准备所有试剂和样本。
2. 从板架上取下多余的微孔板条，将其放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
3. 每孔加入100μL标准品或样本，用封板膜封住，37℃孵育60分钟。
4. 弃去孔内液体，每孔加入 300μL的清洗液，轻微震荡后弃去孔内液体，将酶标板倒扣在吸水纸上轻拍，使残留在孔内的液体全部去除，重复洗板 3 次，此过程也可采用尖嘴喷射瓶，多道移液器或自动洗板机来完成。
5. 每孔加入100μL检测溶液A（生物素标记），用新的封板膜封住，37℃孵育30分钟。
6. 重复步骤4中的洗板程序。
7. 每孔加入100μL检测溶液B（HRP标记），用新的封板膜封住，37℃孵育30分钟。
8. 重复步骤4中的洗板程序。
9. 每孔加入100μL显色液，37℃避光显色5-10分钟。
10. 每孔加入50μL终止液，孔里的颜色应该由蓝色变至黄色，如果孔内颜色为绿色或颜色变化不均匀，轻轻震动酶标板使颜色均一。
11. 擦干酶标板底部水气，立刻用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的O.D.值，如果波长校正可用，则设置为540 nm或570 nm，如果波长校正不可用，则从450 nm的读数中减去540 nm或570 nm的读数，这种修正可去除酶标板读数中的光学偏差，如果没有校正波长，可直接读取450 nm的读数，但读值有可能不准确。

三、标准曲线制作
每个标准品和样本的复孔平均O.D.值，减去空白孔平均O.D.值后，以标准品的浓度为横坐标，O.D.值为纵坐标，绘出标准曲线（R2值越趋近于1曲线越精确），然后再将样本的平均O.D.值代入标准曲线的回归方程式，计算出样品浓度。
如果样品已经稀释，从标准曲线上算出的浓度需乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

四、标曲案例
标准曲线仅用于演示，每次实验均需生成单独的标准曲线。

五、检测范围
1.25ng/mL—80ng/mL

六、最低检测限(MDD)
＜1ng/mL
MDD是测试20个零标准（标准品/样本稀释液）的平均O.D.值上加两倍标准差后计算相应的浓度来确定的。

七、精密度
批内差： CV<12%
批间差： CV<15%

八、稳定性
试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于10%。

组分和说明（Component and Instruction）

样品清单及储存条件

*在试剂盒保质期内使用

Note

For research use only .