产品简介

BW25113 菌株来源于 E. coli K12 W1485，是 K12 的衍生菌株，与 MG1655 类似，也是一种经过较少 改造，比较接近于“野生型”的大肠杆菌工程菌株。BW25113 作为母系菌株，可以用来制作 E. coli Keio Knockout 文库；同时可作为大肠杆菌模式菌株使用，用来制作各种基因的 Knockout 突变体。另 外，BW25113 可用于构建、扩增质粒使用，但是不含核酸酶 endA1 突变，因此体内核酸酶含量较高， 提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶，以防提取的质粒被降解。 BW25113 感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：F-, DE(araD-araB)567, lacZ4787(del)::rrnB-3, LAM-, rph-1, DE(rhaD-rhaB)568, hsdR514

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁸ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。