产品简介

AGL1 菌株为 C58，RecA 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 Rif 和羧苄青霉素抗性基 因 Carb ，为了便于转化操作 ，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型 Ti 质粒 pTiBo542DT-DNA ， 此质粒含有 vir 基因 （ vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pTiBo542DT-DNA 质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移） 。 pTiBo542DT-DNA 型 Ti 质 粒含有筛选标签：Strep，赋予 AGL1 菌株链霉素抗性，适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作， 经 pCAMBIA2301 质粒检测转化效率 ≥ 5×10³ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：C58 RecA (Rif ^R /Carb^R ) Ti pTiBo542DT-DNA (Strep^R ) Succinamopine

存储条件

-80 ℃保存; 请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除琥珀碱型 Ti 质粒 pTiBo542DT-DNA 外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥5×10³ cfu/μg pCAMBIA2301 DNA。

使用方法

. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置 10 分钟、液氮 5 分钟（或干冰乙醇浴和-80℃冰冻）、37℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟；

3.加入 900 μl 无抗生素的 YEB 液体培养基，于 28℃振荡培养 2~3 小时；

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板上， 倒置放于 28 ℃培养箱培养 2-3 天（当平板只含有 50 μg/ml Kan 时，28 ℃培养 48 h 即可；平板中同时加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 时，需 28 ℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 则需要 28 ℃ 培养 72-90 h）。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 利福平浓度不应高于 25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率；

4.因为 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以一般培养农杆菌时不考虑添加相应抗生素； 5.经本公司测试，该感受态具有氨苄抗性，建议勿使用带氨苄抗性的载体。