产品简介

EHA105 菌株由 EHA101 菌株改造而来，为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基 Rif ，为 了 便 于 转 化 操作 ， 此 菌 株 携 带 一 无 自身 转 运 功 能 的 琥 珀 碱 型 Ti 质 粒 pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件， pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 TDNA 顺利转移)。EHA105 菌株适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。本公司生产的 EHA105 化 学转化感受态细胞经特殊工艺制作，经 pCAMBIA2301 质粒检测转化效率≥10⁴ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：C58 (Rif^R ) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除琥珀碱型 Ti 质粒 pEHA105 外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁴ cfu/μg DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置 10 分钟、液氮冷 冻 5 分钟（或干冰乙醇浴和-80 ℃冰冻）、37 ℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟；

3. 加入 900 μl 无抗生素的 YEB 液体培养基，于 28℃振荡培养 2~3 小时；

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天（当平板只含有 50 μg/ml Kan 时，28℃培养 48h 即可；平板 中同时加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 时，需 28℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 则需要 28℃培养 72-90 h）。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 利福平浓度不应高于 25 μg/ml，利福平浓度过高不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。

4. 由于 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以相关抗性基因可以不用添加； 5. 经本公司测试，该感受态具有氨苄抗性，建议勿使用带氨苄抗性的载体。