产品简介

DH10Bac 菌株主要用于生产重组杆状病毒分子（Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统）。该菌株中含有父 本 bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124；其中， bMON14272 中包含 mini-F 复制子, 卡那抗性基 因, attTn7 位点和 lacZα 互补因子；而辅助质粒 pMON7124 含有 tnsABCD 区，可表达转座蛋白来帮助把 供体质粒上的 mini-Tn7 插入到父本的 bacmid 上的靶标位点。当 DH10Bac 感受态细胞转化了在多克隆 位点克隆了外源片段的供体质粒(如 pFastBac)时，该菌株可生成复合 bacmid。DH10Bac 菌株携带 ϕ80lacZΔM15 突变，因此可用于蓝白斑筛选实验。经 pUC19 质粒转化检测，DH10Bac 感 受态细胞的转化效率可达 10⁸ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galU galK λrpsL nupG /pMON14272 / pMON7124

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留

化学法转化效率≥10⁸ cfu/μg pUC19 DNA

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。