产品简介

p19 蛋白来源于番茄丛矮病毒，可抑制宿主对外源基因的 RNA 沉默效应，提高异源基因转录本的稳定 性，进而促进异源蛋白的表达，广泛应用于转基因植物及烟草叶片，拟南芥叶片，番茄叶片或原生质体 的瞬时表达系统中。GV3101 菌株为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 Rif，为 了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒 含有 vir 基因，pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 质粒含有筛选标签：Gent，赋予 GV3101 菌株庆大霉素抗 性；在 GV3101 菌株中转入 help 质粒：pSoup-p19 即为 GV3101(pSoup-p19)菌株，可帮助 pGreen，62SK， pGs2 等质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（Tet）抗性。适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆 等植物的转基因操作。本公司生产的 GV3101(pSoup-p19)化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pGs2(卡 那霉素抗性)质粒检测转化效率≥ 10³ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：C58 (Rif^R ) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( Gent^R ) Nopaline(pSoup-p19-Tet^R )

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制 除胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 和 pSoup-p19 质粒外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10³ cfu/μg DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μl 感受态细胞中，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置 10 分钟、液氮 5 分钟（或干冰乙醇浴和-80℃冰冻）、37℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟；

3.加入 900 μl 无抗生素的 YEB 液体培养基，于 28 ℃振荡培养 2~3 小时；

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板 上，倒置放于 28 ℃培养箱培养 2-3 天（当平板只含有 50 μg/ml Kan 时，28 ℃培养 48 h 即可；平板中 同时加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 时，需 28 ℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 则需要 28 ℃培养 72-90 h）。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 利福平浓度不应高于 25 μg/ml，利福平浓度过高不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。

4. 由于 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以相关抗性基因可以不用添加； 5. 经本公司测试，该感受态具有氨苄抗性，建议勿使用带氨苄抗性的载体。