产品简介

GV3101(pJIC SA_Rep)菌株为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 Rif，为了 便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质 粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身 的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA) 型 Ti 质粒含有筛选标签：Gent，赋予GV3101 菌株庆大霉素抗性；在 GV3101 菌株中转入 help 质粒： pJIC SA_Rep 即为 GV3101(pJIC SA_Rep)菌株，可帮助 pgR106，pgR107，pGreen，pGs2 系列质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（Tet）抗性。适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆 等植物的转基因操作。本公司生产的 GV3101(pJIC SA_Rep)化学转化感受态细胞经特殊工艺制作， pGs2 (卡那霉素抗性)质粒检测转化效率≥ 10³ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：C58 (Rif^R ) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR ) Nopaline(pJIC SA_Rep -Tet^R )

存储条件

-80 ℃保存; 请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 和 pJIC SA_Rep 质粒外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10³ cfu/μg DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置 10 分钟、液氮 5 分钟（或干冰乙醇浴和-80℃冰冻）、37℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟；

3.加入 900 μl 无抗生素的 YEB 液体培养基，于 28 ℃振荡培养 2~3 小时；

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板上， 倒置放于 28 ℃培养箱培养 2-3 天（当平板只含有 50 μg/ml Kan 时，28 ℃培养 48 h 即可；平板中同时加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 时，需 28 ℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 则需要 28 ℃ 培养 72-90 h）。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 利福平浓度不应高于 25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。

4.因为 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以一般培养农杆菌时不考虑添加相应抗生素； 5. 经本公司测试，该感受态具有氨苄抗性，建议勿使用带氨苄抗性的载体。