产品简介

大肠杆菌 Lemo21(DE3)感受态细胞为 T7 可控表达菌株，专为表达具有挑战性的重组蛋白而设计。 它作为 BL21(DE3)的衍生菌株，不仅继承了其特点，还能够通过改变 T7 溶菌酶（lysY）的水平以 控制表达水平， T7 溶菌酶为 T7 RNA 聚合酶的天然抑制剂。对蛋白表达的精准控制使得 Lemo21(DE3) 成为表达膜蛋白、毒性蛋白、分泌蛋白以及存在可溶性问题蛋白的理想选择。 Lemo21(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ∆hsdS/ pLemo(Cam^R )DE3 = λ sBamHIo ∆EcoRI-B int::(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 ∆nin5 pLemo = pACYC184-PrhaBAD-lysY

产品特性

-BL21(DE3)的增强型菌株；

- 精准的表达调控；

- 在 T7 菌株中表达范围最宽；

- 消除了形成包涵体的潜在可能。

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁸ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。