产品简介

M15(pREP4)蛋白表达菌株含有 pREP4 质粒，该质粒通过 p15A 复制子启动复制，可以与许多原核 表达质粒共存于同一大肠杆菌细胞中；同时该质粒携带 lacI 基因，可高效表达 LacI 抑制蛋白，在 IPTG 诱导前可抑制目标蛋白的本底表达，特别适合毒性基因的表达。M15(pREP4)菌株是 PQE 系 列质粒的配套菌株，特别适合 PQE 系列质粒或由 E. coli T5 启动子驱动蛋白表达的质粒。pREP4 质 粒赋予该菌株卡那霉素抗性。公司生产的 M15(pREP4)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒 检测转化效率达 10⁸ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：F ^- φ80 lacZ M15 thi lac^- mtlrecA⁺ Kan^R

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁸ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。