产品简介

MG1655(DE3)菌株来源于 W1485，是 K12 的衍生菌株，是一种经过较少改造、比较接近于“野生型” 的大肠杆菌工程菌株。MG1655(DE3)外观形态标准，既可做为扩增大肠杆菌野生型基因的模板使用， 也可作为蛋白表达的宿主菌株使用；T7 RNA 聚合酶位于 λ 噬菌体 DE3 区，该区域被整合于 MG1655 的染色体上，该菌株不含核酸酶 endA1 突变。经 pUC19 质粒转化检测，MG1655(DE3)感 受态细胞的转化效率可达 10⁸ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：K12 F^-λ ^- ilvG- rfb-50 rph-1 (DE3)

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁸ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。