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- 产品名称： Cas14a1
- 产品货号： 32119
- 货期： 现货
- 价格与订购： 2090/10450
- 数量：
库存： 100
- 规格： 100pmol 1000pmol
- 产品信息
- 如何订购
产品简介
Cas14a1 核酸酶是一种内切核酸酶，其在 tracrRNA:crRNA（或 sgRNA）的引导下，特异结合并切 割靶标 ssDNA，且无需 PAM 位点。相比于其他的 Cas 蛋白，Cas14 蛋白的分子量普遍较小（400- 700AA），其中，本公司提供的 Cas14a1 的分子量仅为为 64.9 kd（含有 3.4 k 的 N 端标签序列）。 与 Cas12 类似，Cas14a1 也可以结合靶标核酸并激活其 ssDNA 反式切割活性，从而被应用于靶标核 酸的分子检测。然而，与 Cas12 不同的是，Cas14a1 只能结合 ssDNA 靶标，因此：经过扩增富集的 靶标核酸需使用 T7 核酸外切酶进行处理，且其中一条扩增引物需要实验磷硫酰化修饰以确保 T7核 酸外切酶仅切割其中一条链，从而留下 ssDNA 靶标链以用于 Cas14a1 介导的分子检测。更详细的 信息可参见论文（PMID: 30337455）。
产品组成
| 产品货号 | 32119-01 | 32119-02 |
| Cas14a1 Nuclease | 100pmol(10pmol/μL) | 1000pmol(10pmol/μL) |
| 10×Cas14 Buffer | 1mL | 1mL×2 |
| Control Target ssDNA(1μM) | 5μL | 5μL |
| Control tracrRNA:crRNA(10μM) | 5μL | 5μL |
| ssDNA reporter(FAM-HBQ1)(10μM) | 5μL | 5μL |
注：crRNA 应保存于-80 °C 以防止降解。
推荐反式切割体系（20 μL）：
| 组分 | 体积 |
| 10×Cas14 Buffer | 2µL |
| 10µM tracrRNA:crRNA | 1-2µL |
| 10µM Cas14a1 Nuclease | 0.5µL |
| 1µM Target ssDNA | 0.5-1µL |
| 10µM ssDNA reporter | 0.5µL |
| Nuclease-free water up to | 20µL |
| 在冰水浴上混合后，利用荧光定量PCR仪或荧光酶标仪进行检测。Control中的ssDNA reporter为FAM荧光标记。若靶标核酸为扩增的双链DNA，则需在体系中添加T7核酸外切酶。 | |
注：反式切割体系亦可参照文献 PMID:30337455。
正对照反式切割结果：
图 1. Cas14a1 反式切割靶标 ssDNA 的实验结果。 试剂盒中提供的阳性对照为靶标 ssDNA1；图示所 示的靶标终浓度为 10nM；负对照为添加水的反应 组；由 ABI StepOne Plus 荧光定量 PCR 仪检测。
Note
For research use only. Not suitable for clinical or therapeutic use.
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