产品简介

T4 DNA Ligase 可催化 dsDNA 平末端或粘性末端相邻核苷酸的 5′ 磷酸末端和 3′ 羟基末端形成磷酸二酯键，还可催化 RNA 和双链中的 ssDNA 或 RNA 链连接，但不能催化全单链核苷酸连接。适用于标记 RNA 3’ 末端，环化 RNA 和 DNA 寡聚核苷酸，克隆长片段 cDNA 等核酸操作。

产品组成组

Buffer 在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。

单位定义

在20 μL的连接反应体系中，6 μg的λDNA-HindIII的分解物在16℃下反应30分钟时，有50%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个 活性单位 (U)。

质量控制

核酸外切酶残留检测：将2000 U连接酶和0.6 μg λ-Hind III在74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。核酸内切酶残留检测：将2000 U连接酶和0.6 μg 超螺旋pUC18 DNA在74℃下反应1小时，DNA电泳谱带不发生变化。

存储条件

-20℃保存。

使用方法:

1. 在微量离心管中配制连接反应体系: 

2. 16℃连接过夜或22℃反应1小时。

3. 转化：

1）将感受态细胞从-80℃中取出，置于冰浴中融化；

2）将连接产物加入到 100 μL 感受态细胞中（不超过 10 μL），轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3）将离心管置于 42℃水浴锅中，不要晃动，热激 90 s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min；

4）向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC培养基（室温或 37℃预热），后置于 37℃摇床复壮 45 min；

5）取不同体积转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37℃培养箱培养过夜。

Note
For research use only. Not suitable for clinical or therapeutic use.