产品简介

FastPfu DNA Polymerase 是来源于 Pyrococcus furiosus 的高温 DNA 聚合酶，具有耐热型 5´-3´ 的聚合酶活力以及 3´-5´的核酸外切酶活力，属于高保真 DNA 聚合酶。该酶经过生物工程改造后，其扩增能力、保真度都得到进一步增强，并且具有广泛的模板适应性，扩增速度达到 2-4 kb/min。优化的 2× FastPfu buffer 反应缓冲液对于简单或复杂模板、短片段或长片段 PCR 扩增都具有良好的适应性，其中，质粒、λ DNA 等简单模板有效扩增长度可达 40 kb，cDNA 有效扩增长度可达 10 kb，基因组有效扩增长度可达 15 kb。

产品组成

产品应置于-20 ℃保存。 

产品质控

（1）性能检测 1：在 50 μL PCR 反应体系加入 1 U FastPfu DNA Polymerase、100 ng Human RP11 13M9-pBACe3.6 质粒，扩增 15 kb 的 DNA 目的片段，在 30 个循环扩增后经 1%琼脂糖凝胶检测可在 15 kb 处检测到较亮的单一目的条带。

（2）性能检测 2：在 50 μL PCR 反应体系加入 1 U FastPfu DNA Polymerase、大肠杆菌菌落，扩增 5 kb 的 DNA 目的片段，在 30 个循环扩增后经 1%琼脂糖凝胶检测可在 5 kb 处检测到较亮的单一目的条带。

（3）大肠杆菌核酸残留检测：在 20 μL 荧光定量 PCR 反应体系加入 1 U FastPfu DNA Polymerase 和大肠杆菌特异基因扩增引物（如 gapA）；在不加入大肠杆菌 DNA 模板的情况下，20 个循环内荧光信号值在基线范围。

常规 PCR 反应体系：

1. 在冰浴上设置 PCR 反应（供参考）*：

模板:                                               < 500 ng

2× FastPfu Buffer:                          25 μL

Primer 1/2:                                     0.2 - 1.0 μM

dNTPs (10 mM):                             1 μL

FastPfu:                                          1 μL

灭菌蒸馏水 Up to 50 μL

2. PCR 反应参数（供参考）**：

(起始变性):                                      95 ℃ 5 min

(解链):                                             98 ℃ 5 sec

(退火):                                             55 ℃ 30 sec

(延伸):                                             72 ℃ x min （30-35 循环：2 kb/min）

(最终延伸):                                      72 ℃ 7 min

Note
For research use only. Not suitable for clinical or therapeutic use.