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- 产品名称： ToloScript RT SelectMix for qPCR (+ 2-step gDNA Erase-Out)
- 产品货号： 22103
- 货期： 现货
- 价格与订购： 1200
- 数量：
库存： 100
- 规格： 100rxn(20ul rxn)
- 产品信息
- 如何订购
产品简介
ToloScript RT SelectMix for qPCR (+2-Step gDNA Erase-Out) 包含新一代逆转录酶 ToloScript Reverse Transcriptase （RTase）和针对逆转录优化的缓冲液，进一步提高了 cDNA 合成的效率，适用于两步法 qRT-PCR 反应。试剂盒中的 4 × gDNA Erase-Out Mix 可彻底去除 RNA 模板中残留的 gDNA，保证后续定量结果的可靠性；该试剂盒可简化 qPCR 的引物设计过程，无需跨内含子设计引物；5 × ToloScript RT SelectMix 中含有 buffer、dNTPs、ToloScript RTase 以及 RNase inhibitor，并可根据实验需求选择 Oligo (dT)23VN、Random Primers 以及基因特异性引物为逆转录引物。逆转录产物兼容染料法与探针法 qPCR，可进行基因表达的高效分析。
产品组成
| 组分 | 22103-01 |
| RNase-free ddH2O | 2 × 1 mL |
| 4 × 2-Step gDNA Erase-Out Mix | 400 μL |
| 5 × ToloScript qRT SelectMixa | 400 μL |
| Oligo (dT)23VN（10 μM） | 100 μL |
| Random Primers (50 ng/μL) | 100 μL |
| 5 × No RT Control Mixb | 40 μL |
a. 包含 Buffer、dNTP、ToloScript RTase、RNase inhibitor。
b. 除不含 ToloScript RTase 外，其余成分与 5 × ToloScript qRT SelectMix 相同，用于配制 No RT 对照反应。
保存条件
-20 ℃储存。
质量控制
纯度检测：所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶及 RNase 残留。
功能检测：以 1 µg HeLa 细胞总 RNA 为模板进行逆转录反应，通过 qPCR 检测 4 个基因的表达量，Ct 值在批次间产品中基本相同。在 1 µg HeLa 细胞总 RNA 中混入 100 ng 人 gDNA，经 2-Step gDNA Erase-Out Mix 处理后加入 No RT Control Mix，然后进行 qRT-PCR，获得的 Ct 值>40。
实验流程
1. 残留 gDNA 的去除在 RNase-free 离心管中配制如下混合液：
| 4 × 2-Step gDNA Erase-Out Mix | 4 μL |
| 模板 RNA Total RNA | 1 pg -1 µg |
| RNase-free ddH2O | to 15 µL |
用移液器轻轻吹打混匀后置于 42 ℃反应 2 min。
2. 配制逆转录反应体系
在第 1 步的反应管中直接加入 5 × ToloScript qRT SelectMix
| 5 × ToloScript qRT SelectMix | 4 µL |
| 第 1 步的反应液 | 15 µL |
| Oligo (dT)23VN（10 μM） | |
| or/and Random hexamers (50 ng/μL) | 1 μL |
| or Gene specific primers (2 μM) |
用移液器轻轻吹打混匀。
No RT Control 反应(可选)
No RT Control 是指不加逆转录酶的阴性对照反应，用于检验 RNA 模板中是否有 gDNA 残留。在 RNase-free 离心管中配制如下混合液：
| 5 × No RT Control Mix | 4 µL |
| 第 1 步的反应液 | 15 µL |
| Oligo (dT)23VN（10 μM） | |
| or/and Random hexamers (50 ng/μL) | 1 μL |
| or Gene specific primers (2 μM) |
用移液器轻轻吹打混匀。
3. 进行逆转录反应
| 37 ℃* | 15 min |
| 85 ℃ | 5 sec |
* 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域，可将反应温度提高至 50 ℃，有助于提高产量。
产物可立即用于 qPCR反应，或冻存于-20℃，并可在半年内使用；如需长期存放，则建议将反转录 cDNA产物分装后冻存于-80 ℃。cDNA 应避免反复冻融。
注意事项
1. 由于 4 × 2-Step gDNA Erase-Out Mix、5 × ToloScript qRT SelectMix 及 5 × No RT Control Mix 中均含有高浓度的甘油，所以在使用前请短暂离心，并轻弹（或用移液枪轻轻吸打混匀）后，准确吸取。
2. 在 20 µL 逆转录反应体系中建议加入不超过 1 µg 的 Total RNA。若目的基因的表达量非常低，则可以最多加入 5 µg 的 Total RNA；否则，如果加入 RNA 量过高，可能会超出后续 qPCR的线性范围。
3. 本试剂盒制备的 cDNA 产物仅适用于 qPCR 反应，不适用于进行长片段目的基因的 PCR 扩增。
4. 请严格按照说明书推荐的流程进行 gDNA 去除反应：即先加入 4 × 2-Step gDNA Erase-Out Mix 反应后再加入 5 × ToloScript qRT SelectMix 进行逆转录，请勿直接使用逆转录试剂。
Note
For research use only. Not suitable for clinical or therapeutic use.
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