产品简介

ToloScript RT EasyMix for qPCR 包含新一代逆转录酶 ToloScript Reverse Transcriptase（RTase）和针对逆转录优化的最适缓冲液，进一步提高了 cDNA 合成的效率，适用于两步法 qRT-PCR 检测。试剂盒中的 5 × ToloScript qRT EasyMix 含有逆转录反应所需的所有组分，加入模板 RNA 和水即可迅速进行反应。逆转录产物兼容染料法与探针法 qPCR，可进行基因表达的高效分析。

适用范围

高拷贝、低拷贝靶标基因转录水平的检测，与 qPCR 联用。

产品组成

 a. 包含 Buffer、dNTP、ToloScript RTase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo (dT)23VN primer mix。

b. 除不含 ToloScript RTase 外，其余成分与 5 × ToloScript qRT EasyMix 相同，用于配制 No RT 对照反应。 

保存条件

-20 ℃储存。

质量控制

纯度检测：所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶及 RNase 残留。

功能检测：以 1 µg HeLa 细胞总 RNA 为模板进行逆转录反应，通过 qPCR 检测 4 个基因的表达量，Ct 值在批次间产品中基本相同。在 1 µg HeLa 细胞总 RNA 中混入 100 ng 人 gDNA，经 2-Step gDNA Erase-Out Mix 处理后加入 No RT Control Mix，然后进行 qRT-PCR，获得的 Ct 值>40。

实验流程

1. 配制逆转录反应体系在 RNase-free 的离心管中配置如下体系，用移液器轻轻吹打混匀。

No RT Control 反应(可选)

No RT Control 是指不加逆转录酶的阴性对照反应，用于检验 RNA 模板中是否有 gDNA 残留。在 RNase-free 离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。  

2. 进行逆转录反应

* 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域，可将反应温度提高至 50 ℃，有助于提高产量。

产物可立即用于 qPCR 反应，或冻存于-20℃，并在半年内使用；如需长期存放，则建议将反转录 cDNA 产物分装后冻存于-80 ℃。cDNA 应避免反复冻融。

注意事项

1. 由于 5 × ToloScript qRT EasyMix 及 5 × No RT Control Mix 中均含有高浓度的甘油，所以在使用前请短暂离心，并轻弹（或用移液枪轻轻吸打混匀）后，准确吸取。

2. 在 20 µL 逆转录反应体系中建议加入不超过 1 µg 的 Total RNA。若目的基因的表达量非常低，则可以最多加入 5 µg 的 Total RNA；否则，如果加入 RNA 量过高，可能会超出后续 qPCR 的线性范围。

3. 本试剂盒制备的 cDNA 产物仅适用于 qPCR 反应，不适用于进行长片段目的基因的 PCR 扩增。

4. 由于本试剂盒中不含有 gDNA 去除步骤，建议加入 No RT Control 反应步骤。若 RNA 样本中含有 gDNA 污染，建议使用本公司含有 gDNA Erase-Out 的试剂盒（如 22103-01，22106-01 等）。

Note

For research use only. Not suitable for clinical or therapeutic use.