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- 产品名称： ToloScript All-in-one RT EasyMix for qPCR
- 产品货号： 22107
- 货期： 现货
- 价格与订购： 1580
- 数量：
库存： 100
- 规格： 100rxn(20ul rxn)
- 产品信息
- 如何订购
产品简介
本试剂盒是 ToloScript RT EasyMix for qPCR (with 2-Step gDNA Erase-Out，#22106)的升级版本，将原来的两步法优化升级为一步法，可在同一管中同时进行基因组 DNA 去除和逆转录两个反应，操作简便，并可有效降低多步骤操作过程中造成的样品污染和 RNA 降解的风险。本试剂盒中包含的新一代逆转录酶 ToloScript Reverse Transcriptase 可耐受高达 60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的 RNA 模板的逆转录。同时，配合热敏型 DNase 以及针对基因组去除与逆转录一步反应优化的最适缓冲体系，可适用于少量模板或低拷贝基因的逆转录。逆转录产物兼容染料法和探针法 qPCR，分别推荐 ToloBio 通用型 2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix (Universal, #22204)和 2 × Q3 probe qPCR Master Mix (Universal, #22205)，进行高性能的基因表达分析。
产品组成
| 组分 | 2210 7 -01 (100 rxns) |
| 5 × All-in-one RT Buffer a | 400 μL |
| All-in-one Enzyme Mix b | 100 μL |
| All-in-one No RT Control Mix c | 20 μL |
| RNase-free ddH2O | 2 × 1 mL |
b. 包含逆转录和 gDNA 去除反应所需的 ToloScript Reverse Transcriptase, DNase, RNase Inhibitor;a. 包含逆转录和 gDNA 去除反应所需的 Random primers/Oligo (dT)20VN primer mix, dNTP Mixture, Buf er;
c. 除不含 ToloScript Reverse Transcriptasee 外，其余组分与 All-in-one Enzyme Mix 相同
请务必将 All-in-one Enzyme Mix 和 All-in-one No RT Control Mix 置于冰上！
保存条件
-20℃储存，≤ 0℃运输。
实验流程
1. 反应体系在冰上融化各试剂组分，并充分震荡混匀，并在 RNase-free 离心管中配置如下体系：
| 组分 | 体积 |
| 5 × All-in-one RT Buffer | 4 μL |
| All-in-one Enzyme Mix | 1 μL |
| Template RNA | x μL (1 pg ~ 1 μg) |
| RNase-free ddH2O | Up to 20 μL |
请务必用移液器轻轻吹打 8 - 10 次至充分混匀，再短暂离心收集至管底。
No RT Control 反应体系（可选）:
No-RT Control Mix 用于配置无逆转录酶的对照，判断 qPCR 模板是否来自 cDNA。
| 组分 | 体积 |
| 5 × All-in-one RT Buffer | 4 μL |
| All-in-one No RT Control Mix | 1 μL |
| Template RNA | x μL (1 pg ~ 1 μg) |
| RNase-free ddH2O | Up to 20 μL |
请务必用移液器轻轻吹打 8 - 10 次至充分混匀，再短暂离心收集至管底。
2. 反应程序
| 温度 | 时间 |
| 50 ℃* | 15 min |
| 85 ℃ | 5 sec |
如果模板有高 GC 序列或复杂二级结构，可先将逆转录体系 25°C 反应 5 min，再将反应温度提高至 60°C，有助于提高产量。
逆转录产物可立即用于 qPCR 反应，或于-20℃保存，并在半年内使用；长期存放则建议分装后于-80℃保存，避免 cDNA 反复冻融。
注意事项
1. 所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免 RNase 污染。请保持实验区干净整洁；操作时请穿戴干净的手套、口罩，请使用 RNase-free 的枪头、离心管等耗材。
2. 在完成反应体系配制后，请务必进行混匀操作，否则会影响实验数据的稳定性。
3. 在 20 µL 逆转录反应体系中建议加入不超过 1 µg 的 total RNA。若目的基因的反转录产物量非常低，则可以最多加入 5 µg total RNA。否则，如果加入 RNA 量过高，可能会超出后续 qPCR 的线性范围。
4. cDNA 产物可立即用于 qPCR 反应，或冻存于-20℃，并可在半年内使用。如需长期存放，则建议将反转录 cDNA 产物分装后冻存于-80℃，cDNA 应避免反复冻融。
5. 用于 PCR 反应的 cDNA 产物体积建议不超过 PCR 反应体积的 1/10。建议使用 ToloBio 通用型 2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix (Universal，#22204）进行后续的荧光定量实验，该产品具有优异的扩增性能，能实现低浓度模板的稳定扩增；内含特殊的 ROX Passive Reference Dye，适用于所有型号的 qPCR 仪器。
6. 本产品仅作科研用途。
Note
For research use only. Not suitable for clinical or therapeutic use.
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