产品简介

该试剂盒中 5 × ToloScript RT EasyMix 含有新一代逆转录酶 ToloScript Reverse Transcriptase (RTase) 和针对逆转录反应优化的最适缓冲液，大大提高了 cDNA 的合成效率，适用于两步法 qRT-PCR 检测。试剂盒中 4 × gDNA Erase-Out Mix 可彻底去除 total RNA 中残留的 gDNA，保证后续定量结果的可靠性，同时也简化 qPCR 引物设计过程，无需跨内含子设计引物。5 × ToloScript RT EasyMix 含有逆转录反应所需的所有组分，只需加入模板 RNA 和水即可迅速进行反应，同时含有终止 4 × gDNA Erase-Out Mix 反应的抑制剂，保证了 cDNA 的完整性。逆转录产物适用于染料法与探针法 qPCR，可进行基因表达的高效分析。

产品组成

a. 组分中已包含 Buf er、dNTP Mixture、ToloScript RTase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo (dT) 20VN primer mix。

b. 除不含 RTase 和 RNase Inhibitor 外，其余成分与 5 × ToloScript RT EasyMix 相同，用于配制 No RT 对照反应。

保存条件

-20℃储存，≤ 0℃运输。

实验流程

1. gDNA 去除

1.1 gDNA 去除反应体系

2.2 反应程序

如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域，可先将逆转录体系 25℃反应 5 min，再将反应温度提高至 55℃，有助于提高产量。

No RT Control 指不加逆转录酶的阴性对照体系，取 16 μL 第 1 步的反应液加入 4 μL 5 × No RT Control Mix 作为阴性对照，可用于检验 RNA 模板中是否有 gDNA 残留。

注意事项

1. cDNA 产物可立即用于 qPCR 反应，或冻存于-20℃，并可在半年内使用。如需长期存放，则建议将反转录 cDNA 产物分装后冻存于-80℃，cDNA 应避免反复冻融。

2. 用于 PCR 反应的 cDNA 产物体积建议不超过 PCR 反应体积的 1/10。建议使用通用型 2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix (Universal，#22204）进行后续的荧光定量实验，该产品具有优异的扩增性能，能实现低浓度模板的稳定扩增；内含特殊的 ROX Passive Reference Dye，适用于所有型号的 qPCR 仪器。

3. 在 20 µL 逆转录反应体系中建议加入不超过 1 µg 的 total RNA。若目的基因的反转录产物量非常低，则可以最多加入 5 µg total RNA。否则，如果加入 RNA 量过高，可能会超出后续 qPCR 的线性范围。

4. 如果在残留 gDNA 去除步骤中加入的 RNA 体积过大，请确保 RNA 是溶于 Nuclease-free H2O 中，而不是于 TE buffer 中，因 TE buffer 本身会抑制 gDNA 去除以及后续的逆转录反应。

5. 由于 4 × gDNA Erase-Out Mix、5 × ToloScript RT EasyMix 及 5 × No RT Control Mix 中均含有高浓度的甘油，建议使用前轻弹管壁，再简短离心以收集到管底，准确吸取。

6. 为防止 RNase 污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。

7. 本产品仅作科研用途。

Note

For research use only. Not suitable for clinical or therapeutic use.