产品简介

Tuner(DE3)菌株是 BL21 菌株的 lacZY 基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变株，此突变导致 IPTG 以均一 速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。将具有氯霉素抗性的 pLysS 质粒导入 Tuner(DE3)细胞中即是 Tuner(DE3) pLysS，其中 pLysS 表达 T7 溶菌酶，可与 T7 RNA 聚合 酶结合抑制其转录活性，进而降低目标蛋白的本底表达水平，但不干扰 IPTG 诱导的表达，因而非常 适合毒性蛋白的原核表达。该菌株染色体整合了 λ 噬菌体 DE3 区 (DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合 酶)，可同时表达 T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶，可用于 pET 系列，pGEX， pMAL 等质粒 的蛋白表达。Tuner(DE3)pLysS 感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率达 10⁷ cfu/μg DNA。

产品组成 

基因型：F ^- ompT hsdSB (rB ^- mB ^- ) gal dcm lacY1 λ(DE3) pLysS Cam^R

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁷ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。