产品简介

Y1HGold 菌株是 Clontech 公司开发的 GAL4-AbA 酵母单杂系统用菌株，MATα 型，可直接转化质 粒进行筛库试验。Transformation marker 为：ura3，leu2；报告基因为：AbAr。Y1HGold-GAL4- AbA 酵母单杂系统需要两种质粒配套使用：pAbAi 和 pGADT7。质粒 pAbAi 的筛选标志为 URA， 用于表达 pBait-AbAi construct (1~3 个 bait DNA 序列重复串联后克隆到 pAbAi 中)；质粒 pGADT7 的筛选标志为 LEU，用于表达 AD(GAL4 C 端 768 ~ 881 位氨基酸)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白。 GAL4-AbA 酵母单杂系统原理：Aureobasidin A (AbA)是一 种环酯肽抗生素，在低浓度 (0.1-0.2 µg/ml)下即可对酵母产生毒性。基因组中整合了 pBait-AbAi 的酵母菌株 (Bait-Reporter Yeast Strains)， 当猎物蛋白 (Prey)结合到诱饵序列 (Bait DNA)上，GAL4 AD 就会激活 AbAr 的表达，从而能够在含 有抗生素 AbA 的培养基上生长。AbAr 与营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点，可以降低酵 母单杂假阳性发生的概率。

产品组成

基因型：MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1

保藏条件：

-20℃保存（复溶液于 2-8℃保存）；

操作说明：

1.本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液 体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。

2.为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

冷冻管开封：用浸过 75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。

菌株复溶：无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取 1ml 左右复溶液，加入到冷冻管中。轻轻 振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。

菌株复壮：用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。细菌 在 30-35℃培养箱中培养 24-48h，真菌在 23-28℃培养箱中培养 24-72h（必要时，可适当延长培养 时间）。

菌株传代：将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量增大接种量： 如用无菌吸管吸取≥50μL 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓慢释放），适宜温度下培养，用以菌 株的保藏、传代及制备工作菌株。

注意事项：

1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放置会导致菌种衰退；

2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；

3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能正常生长；

4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来电询问；

5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态；培养过程中 亦要保持厌氧状态；

6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要 5-10% CO2 促进生长；

7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。

8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。