产品简介

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(Agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够 感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。K599 发根农杆菌（NCPPB2659）含 有 pRi2659 质粒，具有广泛的宿主范围（葫芦科，豆科，茄科等），同时具有链霉素抗性。本公司 生产的 K599 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301 质粒（卡那霉素 抗性）检测， 转化效率≥ 10³ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：Agrobacterium rhizogenes (Str^R ) pRi2659 (agropine type)

存储条件

-80 ℃保存; 请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除 Ri 质粒 pRi2659 外，无外源质粒 DNA 残留

化学法转化效率≥10³ cfu/μg。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置 10 分钟、液氮 5 分钟（或干冰乙醇浴和-80℃冰冻）、37 ℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟；

3.加入 900 μl 无抗生素的 YEB 液体培养基，于 28℃振荡培养 2~3 小时；

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板 上，倒置放于 28 ℃培养箱培养 2-3 天。

注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. K599 具有链霉素抗性，不适用于选择链霉素抗性基因质粒的转化；

4.本公司测试显示该菌株能够耐受氨苄青霉素，建议勿使用选择氨苄抗性基因质粒的转化。

参考文献：

1 Mankin S, et al. 2007. Disarming and sequencing of Agrobacterium rhizogenes strain K599 (NCPPB2659) plasmid pRi2659. In Vitro Cell Dev Biol Plant 43:521–535.

2 Jose V, et al. 2016. Draft Genome Sequence of Agrobacterium rhizogenes Strain NCPPB2659. Genome Announc 4: e00746-16.