产品简介

EHA101 菌株为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 Rif，为了便于转化操作， 此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有 vir 基 因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的 TDNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移)。pEHA101 (pTiBo542DTDNA) 型 Ti 质粒含有筛选标签：Kan，赋予 EHA101 菌株和卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、烟 草等植物的转基因操作。本公司生产的 EHA101 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2 质粒（壮观霉素抗性）检测转化效率≥ 10⁴ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：C58 (Rif^R ) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (Kan^R ) Nopaline

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

胭脂碱型 Ti 质粒 pEHA101 外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥ 10⁴ cfu/μg DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μl 感受态细胞中，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置 10 分钟、液氮 5 分钟（或干冰乙醇浴和-80℃冰冻）、37℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟；

3.加入 900 μl 无抗生素的 YEB 液体培养基，于 28℃振荡培养 2~3 小时；

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板上， 倒置放于 28 ℃培养箱培养 2-3 天（当平板只含有转化所用双元载体抗生素时，28 ℃培养 48 h 即可；平板中 同时加入双元载体抗生素，20 μg/ml Rif 时，需 28℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 则需要 28℃培养 72-90 h）。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 利福平浓度不应高于 25 μg/ml，利福平浓度过高不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。

4. 由于 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以相关抗性基因可以不用添加；

5. 经本公司测试，该感受态具有氨苄抗性，建议勿使用带氨苄抗性的载体。