产品简介

LBA4404菌株为 Ach5型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 Rif，为了便于转化操作，此 菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型 Ti 质粒 pAL4404，此质粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入 植物基因组必需的元件，pAL4404 质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 TDNA 顺利转移)。 pAL4404 型 Ti 质粒含有筛选标签：Strep，赋予 LBA4404 菌株链霉素抗性，适用于菸 草、番茄、烟草等植物的转基因操作。本公司生产的 LBA4404 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作， pCAMBIA2301 质粒检测转化效率≥ 10⁴ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：Ach5 (Rif^R) Ti pAL4404 (Strep^R) Octopine

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除章鱼碱型 Ti 质粒 pAL4404 外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁴ cfu/μg DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置 10 分钟、液氮 5 分 钟（或干冰乙醇浴和-80℃冰冻）、37℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟；

3.加入 900 μl 无抗生素的 YEB 液体培养基，于 28 ℃振荡培养 2~3 小时；

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板 上，倒置放于 28 ℃培养箱培养 2-3 天当平板只含有 50 μg /ml Kan 时，28 ℃培养 48 h 即可；平板中同时 加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 时，需 28℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 则需要 28 ℃ 培养 72-90 h）。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 利福平浓度不应高于 25 μg/μl，利福平浓度过高不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。

4. 由于 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以相关抗性基因可以不用添加。