产品简介

GT115 菌株，是专门用来克隆含有发夹结构（Hairpin）或重复序列等 DNA 二级结构的基因序列的大肠 杆菌菌株。大肠杆菌中存在一种 SbcCD 蛋白复合体，可以识别 DNA 发夹结构，并将其切除；将 sbcC 和 sbcD 两个基因突变，便增强了发夹结构 DNA 的稳定性。同时在大肠杆菌基因组中引入 uidA(∆MluI)::pir-116，使 GT115 可以表达 π 蛋白，从而让含有 R6Kg ori 复制子的质粒（如 pCpG-mcs、 pCpG-LacZ、pCpG-siRNA 等）可以在该菌株中正常复制。该菌株还含有具有核酸酶 (endA)突 变、重组酶 (recA)突变，因此可以增强外源 DNA 的稳定性。经 pUC19 质粒转化检测，GT115 感受态细胞的转化效率可达 10⁸ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：F^-mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZ∆M15∆lacX74 recA1 rpsL (Str^R ) endA1 ∆dcm uidA (∆MluI)::pir116 ∆sbcC-sbcD

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥10⁸ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。