产品简介

Rosetta 系列菌株来源于 BL21 系列宿主菌，该系列菌株含有原本在大肠杆菌中稀少的真核细胞密码 子，增加了真核细胞的蛋白表达水平。Rosetta 2(DE3)来源于 Rosetta(DE3)，本菌株含有 pRARE2 质 粒，除了能够提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六个稀有密码子 的 tRNA 外，还提供了第七个稀有密码子 CGG 的 tRNA，这使得该宿主菌相对于其他大肠杆菌，能够 提供更加“通用”的蛋白质表达，从而提升目的蛋白表达水平。DE3 是溶源性的 λDE3 序列,可表达 T7 RNA 聚合酶，因而适用于 pET 系列载体，及其他 T7 启动子系列的载体。值得注意的是，pRARE2 质 粒具有氯霉素抗性。Rosetta 2(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率达 10⁸ cfu/μg DNA。

产品组成

基因型：F ^- ompT hsdSB (rB ^– mB ^– ) dcm gal (DE3) pRARE2 (argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL, argX)

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除 pRARE2 外，无外源质粒 DNA 残留；

除 化学法转化效率≥10⁸ cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。